如果需在凝膠成像系統(tǒng)上直接切膠,使用機器自帶的切膠裝置,即可進行切膠操作。
1.電泳的buffer和gel都是新制的,切膠的臺子清理干凈,刀片最好洗凈滅菌,總之一句話就是保證切下的帶沒有外源dna污染。
2.切膠是要把整個目的片斷所在位置的膠全部回收。為了減少膠的體積,可以用相對比較薄的膠來做,只要夠點樣即可,也可采用薄而寬的梳子來跑膠。
3.關(guān)于防護,在一般有機玻璃后就足夠了,戴上防護面具以保護眼睛,如果你戴樹脂眼鏡就可以了。要是非常害怕紫外照射,或者對于膠有特殊要求,例如要求不含EB,你可以采用點marker和帶刻度的尺子一起照相的方法來確定目的條帶在膠上的位置進行切膠。
按照正常程序點marker跑膠,然后切下有marker的膠,EB染色,紫外燈下與帶刻度的尺子一起照相。由于要回收的帶與marker間的相對位置已知,根據(jù)尺子來衡量未染色膠上目的帶的位置即可。如果覺得很難判斷,可以直接在marker邊點少量的樣,這樣位置就容易確定了。
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